dCas9蛋白
产品介绍
dCas9（核酸酶失活Cas9，dead Cas9）是CRISPR-Cas9基因编辑系统中通过定点突变改造获得的重要变体。该蛋白通过引入D10A和N863A两个关键点突变，分别作用于RuvC和HNH两个核酸酶结构域的催化中心，从而完全消除了其切割DNA双链的内切酶活性。然而，这一改造并未影响其基于gRNA引导的DNA靶向结合能力。dCas9保留了由gRNA（引导RNA）精准导航、特异性识别和结合基因组中特定DNA序列的功能，只是在其到达目标位置后，不再像野生型SpCas9那样进行切割破坏。
dCas9的这种特性使其成为基因调控和功能研究的理想平台。dCas9可用于活细胞中基因组特定区域的动态成像；与表观修饰酶融合时，可精确改写局部表观遗传标记。这些应用使dCas9成为基础研究、合成生物学和潜在基因治疗中不可或缺的工具，实现了从基因编辑到基因调控的功能拓展。
产品参数
参数 | 规格 |
来源 | 大肠杆菌重组表达 |
分子量 | ~161 kDa |
浓度 | 20μM |
PAM序列 | 5'-NGG-3' |
突变位点 | D10A + N863A |
纯度 | ≥95% (SDS-PAGE) |
内毒素 | <1 EU/μg |
储存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Gly |
10 x 反应缓冲剂 | 50mM Tris-HCl，100mM NaCl，10mM MgCl2,100 μg/ml BSA，pH7.9 |
储存条件 | -80°C长期保存，-20°C短期保存 |
产品规格
规格 | 货号 | 浓度 | 体积 |
100pmol | GR101701 | 20μM | 5μL |
500pmol | GR101702 | 20μM | 25μL |
2500pmol | GR101703 | 20μM | 125μL |
应用场景
活细胞动态成像：
在显微镜下实时追踪特定基因在细胞核中的位置、运动轨迹。
观察染色体的三维结构，或标记端粒长度变化。传统FISH技术只能做固定后染色，而dCas9可以看到活的细胞过程。
生物传感与核酸检测：将dCas9固定在试纸条或电极上，结合荧光基团。当gRNA识别到病毒RNA或耐药菌基因时，dCas9结合目标并产生光信号或电信号。
人工DNA环与染色质构象调控：
dCas9可以成对使用，分别结合在两个相距较远的DNA位点上，然后通过蛋白二聚化将这两个位点拉近。用于研究远距离增强子与启动子的相互作用，或人为改变染色质拓扑结构。
参考文献
1. Gilbert LA, et al. (2013). CRISPR-mediated modular RNA-guided regulation of transcriptionin eukaryotes. Cell. 154(2):442-451.
2. Perez-Pinera P, et al. (2013). RNA-guided gene activation by CRISPR-Cas9–basedtranscription factors. Nat Methods. 10(10):973-976.
3. Chavez A, et al. (2015). Highly efficient Cas9-mediated transcriptional programming. NatMethods. 12(4):326-328.
4. Ramu G, et al. (2018). Paired D10A Cas9 nickases are sometimes more efficient than individual nucleases for gene disruption.Nucleic Acids Res. 46(12):e71.
