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腺相关病毒包装服务

腺相关病毒包装服务

腺相关病毒是(Adeno-associated virus,AAV)是一类细小病毒,对于分裂和非分裂细胞均具有感染能力,通常依赖于腺病毒或疱疹病毒的共同感染才能帮助其在体内复制扩增。重组腺相关病毒(recombinant AAV, rAAV) 载体只需携带顺式元件ITR就能生产出重组AAV颗粒,由于缺乏Rep基因,重组AAV病毒基因组不整合宿主基因组,作为染色体外游离体长期存在。这些特性使AAV病毒载体成为极具应用前景的基因给药工具。

相比于其他病毒载体,AAV具有很多优势:
1)扩散性强:rAAV体积小,滴度高,与腺病毒和慢病毒相比具有更高的扩散性,可以穿过血脑屏障,是感染神经系统的理想工具;
2)特异性高:rAAV具有多种血清型,不同血清型对不同组织的识别和感染能力不同,是动物实验的首选工具病毒;
3)安全性高:rAAV持续存在于染色体外,降低了突变的风险,且免疫原性低,可以直接用于人体基因治疗。

舒桐科技依据多年病毒包装平台的经验,从 DNA合成(带有感兴趣的启动子或报告基因等)、腺相关病毒表达载体构建,到病毒生产可以为您提供全面的服务。

下面是具体服务内容:

服务类型规格目录价货期
AAV过表达滴度≥1×10E12 vg/ml;体积1ml欢迎询价2-4周
AAV干扰滴度≥1×10E12 vg/ml;体积1ml欢迎询价2-4周


腺相关病毒(AAV)简介

AAV结构

腺相关病毒的直径在20-26nm范围内,其直径为腺病毒的1/5,慢病毒的1/4,呈现20面体结构,对分裂细胞和非分裂细胞均可感染。

AAV基因组

腺相关病毒含有约4.7kb的单链线性DNA基因组。基因组两端为末端反向重复序列(ITR),对于病毒的复制和包装具有重要作用;中间基因组编码两类蛋白Rep和Cap,Rep蛋白参与病毒的复制和整合,Cap蛋白为病毒衣壳蛋白。衣壳包含三种类型的亚基VP1、VP2和VP3,比例为1:1:10 (VP1:VP2:VP3)。基于AAV的基因组结构,基因工程化的AAV载体删除了全部AAV蛋白编码序列,添加了外源基因的表达盒。唯一的病毒来源序列是ITR,它们是在病毒包装过程中指导AAV复制和包装所必需的。病毒编码序列的完全去除使AAV的包装能力最大化,并且有助于它们在体内递送时的低免疫原性和细胞毒性。

AAV血清型

现阶段研究人员已发现12种人类AAV 血清型(AAV1至AAV12)和 100多种非人类灵长动物AAV血清型。不同AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性,因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别,这也导致不同血清型转染的组织类型、细胞类型和感染效率也各不相同。下表是AAV1至AAV9的不同组织亲噬性。

TissueOptimal Serotype
CNSAAV1,AAV2,AAV4,AAV5,AAV8,AAV9
CNSAAV1,AAV2,AAV4,AAV5,AAV8,AAV9
HeartAAV1,AAV8,AAV9
KidneyAAV2
LiverAAV7,AAV8,AAV9
LungAAV4,AAV5,AAV6,AAV9
PancreasAAV8
Photoreceptor CellsAAV2,AAV5,AAV8
RPE (Retinal Pigment Epithelium)AAV1,AAV2,AAV4,AAV5,AAV8
Skeletal MuscleAAV1,AAV6,AAV7,AAV8,AAV9


AAV包装流程

舒桐科技可以提供从AAV质粒设计、构建、包装至表达分析的全套服务。不仅如此,舒桐科技也可以提供全面的AAV载体和表达系统,用于体内和体外表达human/mouse/rat ORFs,lncRNA、circRNA、shRNAs和CRISPR/gRNA。舒桐科技生产的AAV具有滴度高、纯度高和稳定性高的三高优点。下面是AAV从头合成的流程:

AAV滴度检测

舒桐科技的AAV病毒是通过用qPCR的方法来检测的病毒滴度,得到的结果为包装得到的病毒颗粒数。其原理是用腺相关病毒基因组特异性引物进行实时定量PCR。在定量曲线的线性范围内,Ct值与已知拷贝数质粒的Ct值的比值即为病毒基因组的初始拷贝数。

服务特色

  1. 载体全:多种组织特异性启动子和多种报告基因可供客户选择。

  2. 货期短:AAV克隆载体均与我们18,000个预制人源ORF cDNA克隆MCS区通用,行业中生产周期短。

  3. 滴度高:可提供1012VG/ml及以上滴度的病毒,可高达1014VG/ml。

  4. 服务优:可根据客户具体实验,由公司专业技术人员提供载体构建方案,提供特殊定制服务。